一、復蘇
1.把凍存管從液氮中取出來，當即投入37℃水浴鍋中，細微搖擺（留意防止蓋子不緊致使液體進入凍存管）。液體都消融后(大概1-1.5分鐘)，拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來)，1000轉離心5分鐘。
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3.把上清液倒掉，加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖擺，使培養皿中的細胞均勻分布。
4.標好細胞品種和日期、培養人姓名等，放到37℃的5%CO2培養箱中培養，細胞貼壁后換培養基。
5.依據細胞增長速度2-3天換一次培養基。
二、傳代
1.培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2.把原有培養基吸掉。
3.加恰當的胰蛋白酶(能覆蓋細胞就行)，消化1-2分鐘。
4.細胞都變圓后參加等體積的含血清的培養基終止消化。
5.用移液槍吹打細胞，讓細胞懸浮起來。
6.把細胞吸到10ml或15ml的離心管中，1000轉離心5分鐘。
7.倒掉上清液，加1-2ml培養基，把細胞都吹起來。
8.依據細胞品種把細胞傳到幾個培養皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。持續培養。
三、凍存
把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞品種，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。
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