上海晶抗生物牛ELISA試劑盒實驗前準備要點
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)技術因其特異性強、靈敏度高、操作簡便等特點,廣泛應用于牛相關疫病診斷、抗體/抗原檢測等領域。牛ELISA試劑盒的操作質(zhì)量直接影響檢測結果的準確性與可靠性,以下是涵蓋全流程的核心操作要點,需嚴格遵循以保障實驗成功。

一、實驗前準備要點
1. 試劑盒與試劑檢查
核對試劑盒完整性:確認試劑盒包含微孔板、標準品、酶標抗體/抗原、底物液、終止液、洗滌液等所有組分,檢查各試劑瓶標簽是否清晰、有無破損漏液情況。
查看試劑有效期:所有試劑需在有效期內(nèi)使用,超過有效期的試劑會導致靈敏度下降、非特異性反應增強,嚴禁使用。
試劑儲存條件核實:實驗前確認試劑盒及各組分的儲存條件(如2-8℃冷藏、-20℃冷凍等),若儲存不當可能導致試劑失效,取出后需按要求平衡至室溫。
2. 實驗器材準備與校準
核心器材:酶標儀(提前校準波長,確保與試劑盒要求波長一致,如450nm、630nm等)、移液器(含不同量程,如10μL、100μL、1000μL,提前校準精度)、恒溫箱(或水浴鍋,用于孵育,需預熱至設定溫度)、洗板機(或手動洗板瓶,確保洗滌液能均勻沖洗孔內(nèi))、離心管、計時器等。
器材清潔:所有與試劑、樣本接觸的器材需保持清潔干燥,無油污、無殘留雜質(zhì),避免交叉污染。
3. 試劑與樣本預處理
試劑平衡:將試劑盒從冷藏環(huán)境取出后,置于室溫(20-25℃)平衡30-60分鐘,避免因溫度差異導致試劑凝固、反應不均,尤其是酶標抗體、底物液等對溫度敏感的試劑。
洗滌液配制:若試劑盒提供的是濃縮洗滌液,需按說明書比例用蒸餾水或去離子水稀釋,稀釋時確保充分混勻,避免濃度偏差影響洗滌效果(洗滌不會導致背景值升高)。
樣本處理:
樣本類型:常見牛樣本包括血清、血漿、乳汁、組織勻漿等,需根據(jù)試劑盒說明書要求選擇合適的樣本類型,避免使用不符合要求的樣本(如嚴重溶血、渾濁、污染的血清)。
樣本采集與保存:血清樣本需室溫凝固后離心(3000r/min,5-10分鐘)分離血清,避免溶血;血漿樣本需使用抗凝劑(如EDTA、肝素),采集后及時離心分離;樣本若不立即檢測,需按要求冷藏(2-8℃)或冷凍(-20℃/-80℃)保存,避免反復凍融(建議分裝保存)。
樣本稀釋:若樣本濃度過高,需按說明書要求用進行梯度稀釋,稀釋時確保稀釋比例準確,充分混勻,避免稀釋不足導致結果超出檢測范圍或稀釋過度導致假陰性。
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